Technikák

Sejtszeparálás (keratinocita, melanocita, fibroblaszt, limfocita)

Laboratóriumunkban különböző típusú sejtek szeparálása folyik. Szeparálunk vérből mononukleáris sejteket, illetve granulocitákat, bőrből epidermális sejteket: kerainocitákat és melanocitákat, illetve dermális fibroblasztokat. Ezeket a szeparált sejteket vagy közvetlenül vizsgáljuk, vagy a megfelelő körülmények között tenyésztjük, és a tenyésztett sejteket alkamazzuk kísérleteinkhez.

Sejttenyésztés (keratinocita, melanocita, fibroblaszt, limfocita , SZ95 (szebocita sejtvonal), HaCaT (keratinocita sejtvonal), PK (vaginális epitélsejt sejtvonal), SK MEL23 (melanóma sejtvonal), HT-MEL (amelanotikus melanóma sejtvonal), RBL (patkány bazofil leukémia sejtvonal), MEWO (melanint tartalmazó sejtvonal)

A szeparált sejteket 37°C-on, 5% CO2-tartalom mellett, a megfelelő körülmények között tenyésztjük. Laboratóriumunkban melanocitát, keratinocitát, endothel sejteket, fibroblasztokat, különböző típusú sejtvonalakat, mononukleáris sejteket (stb.) tenyésztünk.

MTT teszt (sejt proliferációs teszt)

A sejtek életképességének illetve proliferációjának vizsgálatára szolgáló módszer. A metabolikusan aktív sejtek endocitózissal felveszik a tetrazolium-bromidot és formazán-kristályokká alakítják át. A keletkezett kristályokat sósavas izopropil-alkoholban és SDS-ben oldjuk fel, a kapott oldat színintenzitása arányos a sejtek életképességével, illetve a rendszerben lévő sejtek mennyiségével.

Immunhisztokémia

A sejtekben illetve a sejtek felszínén található szerkezeti vagy funkcionális fehérjék, glikoproteinek vagy komplex szénhidrát molekulák kimutatására alkalmas immunológiai technika. Munkáink során fagyasztott illetve paraffinba ágyazott metszeteket vizsgálunk, amelyeket egészséges és beteg bőrből vett mintákból készítünk.

Immuncitokémia

A sejtekben illetve a sejtek felszínén található szerkezeti vagy funkcionális fehérjék, glikoproteinek vagy komplex szénhidrát molekulák kimutatására alkalmas immunológiai technika. Tenyésztett sejtekből citocentrifugával készített metszeteken végezzük el a hisztokémiai reakciót.

Sejtfestés áramlási citometriás mérésekhez

Különböző sejttípusok sejtfelszíni vagy intracelluláris jellemzőit határozzuk meg fluoreszcens festékkel jelölt monoklonális ellenanyagokkal.

Greiss-féle NO meghatározás

Különböző stimulációkra felszabadult NO mennyiségét vizsgáljuk

Ex vivo modell kidolgozása

Olyan ex vivo modell kidolgozása a célunk, amely hosszabb ideig életképes, mint a szakirodalomban eddig leírt modellek. A későbbiekben ezen a modellen számos folyamatot (pl a bőr öregedését) vizsgálhatunk.

L-DOPA-festés

A melanintermelő sejtekben lévő tirozináz enzim aktivitásának detektálására alkalmas technika.

UVB-besugárzás

Az UVB-fénynek bizonyítottan számos élettani hatása van. Laboratóriumunkban számos vizsgálat folyik, amelyekben különböző típusú sejteken vizsgáljuk az UVB fény hatását.

Melanin-tartalom közvetlen mérése

Melanociták illetve melanóma sejtek NaOH-ban történő feloldásával direkt módon, a színintenzitás detektálásával vizsgáljuk különböző anyagok, illetve az UVB-fény hatását a pigment-tartalom változására .

Candida-killing meghatározás

A sejtek fagocitáló és ölő képességének vizsgálatára szolgáló módszer. Elsősorban granulociták esetében használjuk, de más sejttípusok esetében is alkalmazható.

Kemotaxis

Elsősorban a granulociták kemotaktin felismerését és migrációs képességét vizsgálja, de alkalmazható más sejttípusok esetében is.

Transzfekció

Meghatározott fragmenteket stabilan vagy tranziensen kifejező sejtvonalak előállítása.

LTT (Limfocita transzformációs teszt)

Gyógyszerérzékenység vizsgálatára szolgáló módszer. A perifériás vérből szeparált limfocitákat a vizsgált gyógyszerek különböző koncentrációival inkubáljuk, majd a sejtek életképességét és proliferációját MTT teszttel detektáljuk. Az aktivált limfociták arányából következtetünk a gyógyszerérzékenységre.